La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.
Fundamentos Básicos
La electroforesis capilar (CE) es una técnica de separación que se ha desarrollado gracias a los avances de la cromatografía líquida de alta eficacia. Esta técnica permite separar bastante bien biomoléculas, donde la cromatografía líquida se muestra menos eficaz, y compuestos de pequeña masa molecular, difíciles de estudiar por los procedimientos clásicos de electromigración en soporte. Esta técnica separativa se basa en la migración de las especies de la muestra en disolución, portadoras de una carga eléctrica global, bajo el efecto de un campo eléctrico y en contacto con un soporte (medio de desplazamiento) adecuado. La señal obtenida es la base de la obtención del lectroferograma que muestra el registro de la composición de la muestra. Solo las especies que se dirigen hacia elcátodo serán detectadas.
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Métodos de Detección
En la detección UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a través del capilar en una pequeña zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco. La detección por fluorescencia resulta más sensible si se emplea una fuente láser muy intensa, asociada a menudo a un procedimiento de preformación de derivados de los analitos portadores de un fluoróforo.
Técnicas Electroforéticas
Electroforesis capilar en zona o en disolución libre (CZE): Es el procedimiento de electroforesis más habitual, en el cual el capilar es recorrido por el electrolito a través de un medio buffer que puede ser ácido (fosfato o citrato), básico (borato).
Electroforesis capilar electrocinética micelar (MEKC): En esta variante del procedimiento anterior se añade a la fase móvil un compuesto catiónico oaniónico para formar micelas cargadas. Estas pequeñísimas gotitas inmiscibles con la disolución retienen a los compuestos neutros de un modo más o menos eficaz, por afinidad hidrófila
Electroforesis capilar en gel (CGE): Esta es la transposición de la electroforesis en egel de poliacrilamida o de agarosa. El capilar está relleno con un electrolito que contiene al gel. Se produce un efecto de filtración que ralentiza a lasgrandes moléculas y que minimiza los fenómenos de convección o de difusión.
Isoelectroenfoque capilar (CIEF): Esta técnica también conocida como electroforesis en soporte, consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un anfótero. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su punto isoeléctrico (al pI su carga neta es nula).
Electrocromatografía Capilar
Este tipo de separación asocia la electromigración de los iones, propio de la electroforesis, y los efectos de separación entre fases presentes en la cromatografía. La técnica consiste en la utilización de un capilar relleno con una fase estacionaria, cuyo papel es doble: actúa como material selectivo que debe, por otro lado, participar en la migración del electrolito.
bibliografia:
recuperado de: Illán Morales Becerril_ http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf
1: <img alt="Resultado de imagen para electroforesis" border="0" class="irc_mi" height="175" src="http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/cubeta-horiz.png" style="margin-top: 69px;" width="320">
2: <img alt="Resultado de imagen para electroforesis capilar" border="0" class="irc_mi" height="240" src="http://slideplayer.es/2724400/10/images/11/Electroforesis+Capilar.jpg" style="margin-top: 0px;" width="320">
3: http://gruposfuncionalesycompuestosorgarnico.blogspot.mx/2017/04/procedimientos-de-electroforesis_22.html?m=1
4: https://www.leinco.com/western-blotting-protocol
5: http://almez.pntic.mec.es/~jrem0000/dpbg/1bch/1bch.htm
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